31 de Octubre 2018
Tinci贸n Gram + y Gram -
-Objetivo:
-Realizar una tinci贸n de gram sobre una muestra problema
-Aprender a diferenciar entre microorganismos gram + y gram -
-Fundamento:
Las bacterias se ti帽en seg煤n las propiedades de su pared. Se utiliza un colorante primario cati贸nico que forma un complejo insoluble en agua.
Despu茅s se decolora con alcohol- acetona, las Gram + requieren el colorante primario en sus capas de mure铆na.
Se a帽ade colorante secundario de color rojo, que te帽ir谩 las bacterias Gram-.
-Material:
->Cubeta de tinciones
->Portaobjetos
->Aceite para el microscopio
->Papel de filtro
->Microscopio
->Asa de siembra
->Mechero busen
->Colorantes
->Agua destilada
->Cultivo
-Procedimiento: 1- Encendemos el mechero y abrimos el medio de cultivo ya que hemos creado un ambiente est茅ril.
2- Hacemos un frotis del cultivo en un porta junto con una muestra de soluci贸n salina.
3- Lo dejamos secar, acercando el porta con cuidado al mechero (para que se fije).
4- Echamos el cristal violeta y lo dejamos 1min.
5- Lavamos con agua destilada, sin darle directamente a la extensi贸n.
6- A帽adir el Lugol y dejar 30 segundos.
7- Lavamos con agua destilada y le echamos el alcohol-acetona 60%-30% durante 15-30 minutos.
8- Lavar con agua destilada y a帽adir safranina.
9-Lavamos con agua destilada y dejamos secar.
10- Observamos al microscopio.
11- Limpiar la zona de trabajo con alcohol y lej铆a.
-Resultados:
La muestra es de la toma de muestras que hicimos en las pr谩cticas enterior. Como podemos observar en las fotograf铆as la mayor铆a de las bacterias son Gram - y son cocobacilos.
-Consideraciones de seguridad:
Debemos tener cuidado al lavar los portas, ya que si le damos directamente en el frotis puede que nos lo llevemos. Debemos respetar adecuadamente el tiempo de cada colorante, ya que eso nos podr铆a traer errores a la hora de visualizarla.
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